CHO/dhFr- [CHO-DXB11]倉鼠卵巢細胞
基本信息
產(chǎn)品品牌 :酶聯(lián)生物
中文名稱 :CHO/dhFr-[CHO-DXB11](倉鼠卵巢細胞
種屬 :中國倉鼠
生長特性 :貼壁細胞
細胞形態(tài) :上皮細胞樣
生長培養(yǎng)基 :IMDM+10% FBS+HAT添加劑(PB180631)+1% P/S
凍存條件 :
凍存液 :55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度 :液氮
培養(yǎng)條件 :
氣相 :空氣,95%;CO2,5%
溫度 :37℃
推薦傳代比例 :1:3-1:4
推薦換液頻率 :2~3次/周
參考資料(來源文獻)
背景描述	 :
CHO/dhFr-細胞為二氫葉酸還原酶缺陷細胞。在沒有HT(次黃嘌呤-胸腺嘧啶)時,CHO/dhFr-細胞會死亡;CHO/dhFr-細胞生長培養(yǎng)基中加氨甲喋呤,可以防止對藥物低抗性的回變細胞的生長。
年齡(性別) :雌性,成年
組織來源 :正常卵巢
細胞類型 :自發(fā)永生化細胞
生物安全等級 :1
                         
                                             
                    
                    
                        
                    
                    
                    
                        酶聯(lián)生物經(jīng)過不斷的實驗優(yōu)化和改進,積累了大量的經(jīng)驗,擁有專業(yè)的酶聯(lián)研發(fā)團隊。利用專業(yè)的酶聯(lián)免疫技術(shù)自主研發(fā)的elisa試劑盒,能對血清及其它樣本定量檢測抗原,定性檢測特異性抗體。優(yōu)質(zhì)的試劑,先進的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準確可靠的必要條件。ELISA檢測的方便性、穩(wěn)定性、重復(fù)性和可靠性方面都具有很大的優(yōu)勢。
                        
                        ELISA檢測技術(shù)服務(wù)內(nèi)容: 
                            1、雙抗體夾心法檢測抗原 2、間接法檢測抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術(shù)進行樣本檢測。
                            
                            以上代測費,凡購買本公司試劑盒,我們免費代測!
                            凡購買本公司目錄任何一種酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,您只需將需要檢測的動物(Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey,
                            Pig……)種類和檢測指標(白介素類、激素類)及標本數(shù)量(48T/96T)通知公司業(yè)務(wù)員即可。在接到客戶標本當(dāng)日起,現(xiàn)貨產(chǎn)品一周內(nèi)將檢測報告交到客戶手中!
                            歡迎各科研單位在各種項目上與我們公司開展不同層次的密切合作,以雙贏求發(fā)展,共同進步,為中國檢測事業(yè)的發(fā)展積累經(jīng)驗。
                        
                        二、樣本要求
                            在收集標本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標本盡早檢測,對收集后當(dāng)天就進行檢測的標本,及時儲存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集標本,請造模取材后,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質(zhì)量,所以避免反復(fù)凍融。代測放免標本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書,具體操作注意事項請與我司技術(shù)人員溝通。
                        
                        液體類標本:標本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。
                        血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
                        血漿:應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin
                            或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
                        尿液、胸腹水、腦脊液:用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
                        細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.0-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
                        
                        組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清置于-20度或-70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
                        
                        三、寄標本時需注明以下情況:
                            1、標本編號;2、所測項目;3、是否做復(fù)孔;3、聯(lián)系方式;4、實驗后標本是否寄回。
                        客戶須知:
                            客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負責(zé),如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶承擔(dān)。
                     
                    
                                                 
            為什么要進行細胞系的STR鑒定
        
 
            什么是細胞系鑒定?
        
 
 
        
    
        所謂細胞系鑒定即通過
        STR(短串聯(lián)重復(fù))圖譜所建立細胞系的遺傳特征。一株細胞系的遺傳特征確立后,細胞系可以通過定期的檢測,以防止出現(xiàn)細胞系被誤認或交叉污染的情況。
    
        
    
 
            為什么要進行細胞系鑒定?
        
 
 
            
        
        首先進行細胞系
        
            STR鑒定是很重要的。很多生物醫(yī)藥的研究都采用培養(yǎng)細胞來進行,據(jù)估計,15-20%的實驗室,實驗中所使用的細胞已經(jīng)不是原來的細胞系,或者與其它細胞系發(fā)生了交叉污染。顯然,細胞系遭到污染、特征鑒別錯誤,將會極大的威脅著基于這些細胞而發(fā)表的論文質(zhì)量和研究發(fā)現(xiàn)的正確性。為此,很多細胞庫現(xiàn)在都要對提交來的細胞系進行鑒定,并對細胞系之間的交叉污染進行監(jiān)測。
        
    
        
    
 
            什么細胞最容易污染別的細胞?
        
 
 
            
        
Hela細胞。五十多年來,Hela細胞系被廣泛用于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域的研究,對當(dāng)代生命科學(xué)的發(fā)展屢建奇功,是名副其實的生物學(xué)研究的親歷踐行者。同時很多被廣泛研究的細胞系都被Hela細胞淹沒,因為她長得快,當(dāng)你發(fā)現(xiàn)自己的一個培養(yǎng)瓶里的細胞突然長得很好,而以后都用它傳代做實驗的話,十之八九是搞錯了。
        早在1967年,遺傳學(xué)家StanleyGartler發(fā)現(xiàn)HEp-2和INT407這兩種細胞系都是生物學(xué)領(lǐng)域研究最多的腫瘤細胞系——Hela細胞。
        
    
 
            有哪些細胞曾被
            Hela污染?
        
 
            
        
lnt-407、HEp-2、WISH(人羊膜細胞)、Acc-M(人原發(fā)性延腺癌細胞)、Bcap-37
        (人乳腺癌細胞)、HAC-84(人肺腺癌克?。epatoma(人肝癌細胞)、HUL-42(人肺腺癌細胞)、CNE(人鼻咽癌細胞)、SPC-A-1(人肺腺癌細胞)、Tca-8113(人舌鱗癌細胞)、YTMLC(個舊肺鱗癌細胞)等一百余種。
        
    
 
            如何進行細胞系鑒定?
        
 
 
            
        
        細胞系鑒定目前主要基于國際身份認證委員會的標準。依據(jù)該標準,可以通過多重?zé)晒?/font>
        PCR技術(shù),對人源8個STR位點以及1個性別決定位點進行檢測。我公司做的STR 鑒定,除以上9個位點之外,將對檢測細胞加做12個其它位點信息。
    
        
    
 
            什么時候需細胞系鑒定?
        
 
 
            
        
1)當(dāng)建立或獲得一個新的細胞系時;
    
        
    
2)一個涉及到細胞試驗項目開始/結(jié)束時;
    
        
    
3)在細胞凍存之前,或細胞已連續(xù)培養(yǎng)2~3個月時;
    
        
    
4)發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費前;
    
        
    
5)細胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大時;
    
        
    
6)當(dāng)實驗室使用超過一種細胞系時,所有細胞系應(yīng)先鑒定以排除交叉污染的可能。
        
    
 
            如何提供鑒定樣本?
        
 
 
            
        
        我公司建議客戶對每種進行檢測的目的細胞復(fù)蘇好
        
            T25培養(yǎng)瓶寄送活細胞,或者對每種需要進行檢測的細胞單獨收集在1.5ml離心管中,細胞數(shù)目不少于10的6次方個。細胞需要離心沉淀,并且以PBS清洗盡可能去除上清培養(yǎng)基,沉淀進行冰凍(干冰)保存與寄送。(推薦復(fù)蘇好T25培養(yǎng)瓶常溫寄送活細胞,細胞數(shù)目不少于10的6次方個)
        
    
        
    
 
            如何知道細胞系是否發(fā)生交叉污染了?
        
 
 
            
        
        如果存在細胞系之間發(fā)生交叉污染,而且鑒定用的細胞可能有兩種以上的細胞系時,那么在進行
        
            STR位點檢測的時候,多個位點會出現(xiàn)兩個以上的峰。峰高值表示該等位基因的信號強度,理論上峰值與樣本的DNA濃度有直接的關(guān)系。因此,存在交叉污染的混合細胞系中,其中一個位點中某些峰會明顯高于其他的峰,其中大峰是屬于混合細胞系中那個主要細胞系,而小峰則屬于那個次要細胞系。值得注意的是,當(dāng)發(fā)生兩個或以上細胞混合的時候,檢測結(jié)果看起來非常像細胞系的“遺傳不穩(wěn)定”——當(dāng)一個細胞系存在亞群時,尤其是一些癌細胞系,由于遺傳不穩(wěn)定的存在,在一些位點的STR特性會不同。因此經(jīng)驗豐富的分子專家是非常重要的,他能夠幫助分析復(fù)雜的電泳圖譜(STR峰圖),從而判斷是否由于發(fā)生細胞系交叉污染而導(dǎo)致多等位基因情況。
        
    
        
    
 
            如何根據(jù)
            STR數(shù)據(jù)判斷細胞系的身份?
        
 
             
        
            
        
        收到細胞系鑒定結(jié)果以及
        
            STR信息,可以與參考數(shù)據(jù)庫進行比對。如果細胞樣本的每個STR位點和參考細胞STR位點都能重合匹配,即說明該細胞系正確,反之則說明你的細胞系可能被錯誤標記,交叉污染或發(fā)生遺傳不穩(wěn)定。一般說來,匹配度≥80%即可認為該細胞系正確,匹配度<80%則說明該細胞系的來源需要被懷疑。
        
    
        
    
提 示 : 
            如果細胞系被鑒定出發(fā)生交叉污染或錯誤標記,則需要拿更早代數(shù)的細胞進行鑒定,從而找到問題的起源或者直接從可靠的機構(gòu)購買一株新的細胞系。