簡(jiǎn)介
含T-細(xì)胞免疫球蛋白粘蛋白域蛋白4（TIMD4），也被稱為T(mén)細(xì)胞膜蛋白4（TIM-4），是由TIMD4基因編碼的蛋白質(zhì)。它包含具有整聯(lián)蛋白結(jié)合位點(diǎn)的IgV結(jié)構(gòu)域，以及用于磷脂酰絲氨酸的獨(dú)特的金屬離子依賴性配體結(jié)合位點(diǎn)。它還含有具有高水平O-糖基化的粘蛋白結(jié)構(gòu)域。與其他TIM蛋白相比，它在其細(xì)胞內(nèi)尾部結(jié)構(gòu)域中不含酪氨酸磷酸化基序。與其他主要在T細(xì)胞上表達(dá)的TIMs不同，它在APC上表達(dá)，例如樹(shù)突狀細(xì)胞或巨噬細(xì)胞。它作為T(mén)IM-1的配體，也作為磷脂酰絲氨酸的受體。然而，它的磷脂酰絲氨酸結(jié)合并不介導(dǎo)信號(hào)傳導(dǎo)，而是更多地作為系留受體起作用。它也能夠通過(guò)非TIM-1受體結(jié)合來(lái)抑制幼稚的T細(xì)胞，但一旦T細(xì)胞處于活性狀態(tài)，它就會(huì)作為積極的調(diào)節(jié)因子，幫助維持它們的活性。巨噬細(xì)胞上的TIM-4表達(dá)在其穩(wěn)態(tài)維持中起重要作用。它在Th2開(kāi)發(fā)中起著重要作用。因此，它在過(guò)敏的發(fā)展中發(fā)揮作用。它也被認(rèn)為是腫瘤發(fā)展的一個(gè)因素。它還介導(dǎo)腫瘤部位的自噬，這導(dǎo)致抗原呈遞減少，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤的耐受性增加。
本試劑盒小鼠TIMD4免疫測(cè)定是一種三步法固相夾心ELISA，用于測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清和血漿中的小鼠TIMD4。試劑盒包含大腸桿菌表達(dá)重組小鼠TIMD4和針對(duì)重組蛋白產(chǎn)生的抗體。使用天然小鼠TIMD4獲得的結(jié)果顯示出與使用重組標(biāo)準(zhǔn)品獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線平行的線性曲線。這些結(jié)果表明，該試劑盒可用于測(cè)定天然小鼠TIMD4的相對(duì)質(zhì)量值。
檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù)：將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上，捕獲樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的待測(cè)物TIMD4，孵育清洗后，再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行孵育后清洗，形成“捕獲抗體-抗原-檢測(cè)抗體”免疫復(fù)合物，隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過(guò)氧化物酶進(jìn)行孵育，待孵育結(jié)束后清洗，接著加入TMB顯色液后，若樣本中有待測(cè)物則顯藍(lán)色，則加入終止液停止反應(yīng)。檢測(cè)過(guò)程中游離的成分均被洗去，用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)OD值，顏色的深淺和樣品中的待測(cè)物的含量呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中TIMD4的濃度。
雙抗體夾心模式圖
按操作順序形成抗體夾心結(jié)構(gòu)后，加入TMB 底物，板孔液體由無(wú)色變成藍(lán)色，再加入終止液變?yōu)辄S色后進(jìn)行吸光度值測(cè)定。
檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的局限性
僅供科研使用，不能用于臨床診斷或治療。
試劑盒的使用期限不得超過(guò)試劑盒標(biāo)簽上的有效期。不要將試劑與其他批次或來(lái)源的試劑混合使用或替換使用。
如果樣品產(chǎn)生的值高于最高標(biāo)準(zhǔn)，則用測(cè)定稀釋劑進(jìn)一步稀釋樣品，并重復(fù)測(cè)定。稀釋劑、實(shí)驗(yàn)員、移液技術(shù)、洗滌技術(shù)、培養(yǎng)時(shí)間或溫度以及試劑盒使用年限的任何變化都可能導(dǎo)致結(jié)合變化。
樣本采集、處理和存儲(chǔ)的變化可能會(huì)導(dǎo)致樣本值的差異。
本試劑盒實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)消除了不同生物樣品中可能潛在的干擾因素的影響，但并不能涵蓋所有潛在影響因素。不能排除存在其他干擾的可能性。
操作要點(diǎn)
混合蛋白質(zhì)溶液時(shí)，應(yīng)始終避免起泡。為了避免交叉污染，在添加每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、樣品和試劑時(shí)應(yīng)更換移液器槍頭。此外，每種試劑應(yīng)單獨(dú)使用容器。
確保試劑不間斷地添加到板孔中。為了確保準(zhǔn)確的結(jié)果，在孵育步驟中需要粘合好封板膜。
當(dāng)使用自動(dòng)洗板機(jī)時(shí)，在加入洗滌緩沖液后加入30秒的浸泡期，或者在洗滌步驟之間將板旋轉(zhuǎn)180度，可以提高測(cè)定精度。
顯色劑應(yīng)保持無(wú)色，直到添加到板中。確保顯色劑不受光線照射。顯色劑應(yīng)從無(wú)色變?yōu)樗{(lán)色。
應(yīng)按照與顯色劑相同的順序?qū)⒔K止液添加到板中。加入終止液后，孔中形成的顏色將從藍(lán)色變?yōu)辄S色。綠色的孔表示終止液未與基質(zhì)溶液充分混合。
試劑盒組成及儲(chǔ)存條件
需要的其他材料
?酶標(biāo)儀，包含450nm測(cè)定波長(zhǎng)，同時(shí)包含600-680nm校正波長(zhǎng)更佳；
?移液器及槍頭；
?蒸餾水或去離子水；
?100-1000 mL刻度量筒；
?洗瓶、排槍或自動(dòng)微孔板清洗機(jī)；
?水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；
?用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
注意事項(xiàng)
此試劑盒提供的終止液為稀硫酸溶液，具有一定腐蝕性，應(yīng)謹(jǐn)慎操作。
該試劑盒中的某些成分含有防腐劑，可能會(huì)引起皮膚過(guò)敏反應(yīng)，應(yīng)佩帶口罩避免吸入薄霧。
顯色劑B可能會(huì)引起皮膚、眼睛和呼吸道刺激，應(yīng)佩帶口罩避免吸入薄霧。
佩戴防護(hù)手套、防護(hù)服、眼睛和面部防護(hù)用品。處理后徹底洗手。
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