細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)問(wèn)題了應(yīng)該怎么辦

細(xì)胞無(wú)法在培養(yǎng)器皿上貼壁生長(zhǎng)<o:p></o:p> 1. 細(xì)胞胰酶消化過(guò)度：縮短胰酶消化時(shí)刻或削減胰酶用量。<o:p></o:p> 2. 支原體污染：阻隔細(xì)胞，查看是不是傳染支原體；清潔通風(fēng)廚和培育箱，如細(xì)胞被污染，滅菌處理后丟掉。<o:p></o:p> 3. 培育基中無(wú)附著因子：如果運(yùn)用的是無(wú)血清配方，應(yīng)保證富含附著因子或許運(yùn)用經(jīng)過(guò)包被的培育板。<o:p></o:p> 一、細(xì)胞成長(zhǎng)緩慢<o:p></o:p> 1. 培育基或血清改變，比較不同培育基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有無(wú)區(qū)別；經(jīng)過(guò)成長(zhǎng)試驗(yàn)對(duì)比新老批次血清有無(wú)區(qū)別；增大細(xì)胞初始接種密度；使細(xì)胞逐漸習(xí)慣新的培育基。<o:p></o:p> 2. 必需成長(zhǎng)推進(jìn)成分（如L-谷氨酰胺或成長(zhǎng)因子）耗竭、缺乏或分解：去掉原培育基，參加新鮮培育基；向培育基中增加成長(zhǎng)推進(jìn)成分（如L-谷氨酰胺）。<o:p></o:p> 3. 輕度細(xì)菌或真菌污染：在不增加抗生素的條件下進(jìn)行培育，如細(xì)胞被污染，滅菌處理后丟掉。<o:p></o:p> 4. 時(shí)刻存儲(chǔ)不妥：血清應(yīng)于-5℃至-20℃下貯存；培育基應(yīng)于2℃~8℃下避光貯存；盡量削減血清和培育基見(jiàn)光時(shí)刻。<o:p></o:p> 5. 細(xì)胞初始接種密度低：增大活細(xì)胞接種密度。<o:p></o:p> 6. 細(xì)胞變老、老化：將老化細(xì)胞丟掉，取用代數(shù)較少的細(xì)胞。<o:p></o:p> 7. 支原體污染：阻隔細(xì)胞，查看是不是傳染支原體；清潔通風(fēng)廚和培育箱，如細(xì)胞被污染，滅菌處理后丟掉。<o:p></o:p> 二、培育基pH值改變敏捷<o:p></o:p> 1. 培育箱CO2分壓設(shè)置過(guò)錯(cuò)：依據(jù)培育基中NaHCO3的濃度增大或下降培育箱CO2的分壓，NaHCO3濃度為2.0-3.7g/L時(shí)，應(yīng)相應(yīng)地運(yùn)用5%-10%的CO2分壓。<o:p></o:p> 2. 細(xì)胞培育瓶瓶蓋過(guò)緊：將瓶蓋旋松1/4圈。<o:p></o:p> 3. 碳酸氫鹽緩存體系緩沖才能缺乏：參加HEPES緩沖液，使其終濃度為10-25mM。<o:p></o:p> 4. 培育基中鹽含量不正確：CO2平衡環(huán)境中運(yùn)用以Earle平衡鹽為根底的培育基，大氣條件下運(yùn)用以Hanks平衡鹽為根底的培育基。<o:p></o:p> 5. 細(xì)菌、酵母或真菌污染：將細(xì)胞和培育基滅菌處理后丟掉。<o:p></o:p> 三、細(xì)胞凋亡<o:p></o:p> 1. 培育箱中無(wú)CO2：監(jiān)測(cè)培育箱中CO2運(yùn)用速度以便斷定及時(shí)更換氣瓶；常常查看管路銜接處是不是漏氣；不要頻頻敞開培育箱門。<o:p></o:p> 2. 培育箱內(nèi)溫度有動(dòng)搖：監(jiān)測(cè)培育箱內(nèi)溫度，及時(shí)校對(duì)。<o:p></o:p> 3. 運(yùn)用抗生素到達(dá)毒性濃度：削減抗生素的用量；運(yùn)用無(wú)血清培育基時(shí)，抗生素濃度應(yīng)下降至1/10。<o:p></o:p> 4. 細(xì)胞復(fù)蘇或凍存時(shí)遭到損害：取用新的細(xì)胞。<o:p></o:p> 5. 培育基的滲透壓不合適：查看徹底培育基的滲透壓。大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞可耐受260~350mOsm/kg的滲透壓，參加某些試劑和藥物后會(huì)影響培育基的滲透壓；昆蟲細(xì)胞培育基的滲透壓（340~380mOsm/kg）要高于哺乳動(dòng)物細(xì)胞。<o:p></o:p> 6. 培育基中毒性代謝商品積蓄：去掉原培育基，換用新鮮培育基。<o:p></o:p> 四、懸浮細(xì)胞集成團(tuán)<o:p></o:p> 1. 存在鈣離子和鎂離子：用不含鈣離子和鎂離子的平衡鹽溶液清潔細(xì)胞，輕輕吹打細(xì)胞，使其構(gòu)成單細(xì)胞懸液。<o:p></o:p> 2. 支原體污染：阻隔細(xì)胞，查看是不是傳染支原體；清潔通風(fēng)廚和培育箱，如細(xì)胞被污染，滅菌處理后丟掉。<o:p></o:p> 3. 蛋白水解酶消化過(guò)度導(dǎo)致細(xì)胞裂解、DNA開釋：用0.001%DNA酶I處理細(xì)胞；用PBS沖刷后再接種到新培育基中。<o:p></o:p> 本司產(chǎn)品火熱促銷中，主營(yíng)產(chǎn)品有elisa試劑盒、血清、細(xì)胞株、規(guī)范品、染色液、培育基、抗體等，我司與各大高校醫(yī)院均有協(xié)作。產(chǎn)品報(bào)價(jià)優(yōu)惠，質(zhì)量保證，產(chǎn)品買的多折扣就多，另有禮物贈(zèng)送，歡迎來(lái)電訂貨！本公司產(chǎn)品僅用于科研使用，不供臨床實(shí)驗(yàn)<o:p></o:p>

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