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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的溫育方法

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中通常有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶聯(lián)絡(luò)物后?？乖贵w反響的完畢需求有必定的溫度和時(shí)刻，這一保溫進(jìn)程稱(chēng)為溫育(incubation)，有人稱(chēng)之為孵育，在ELISA中似不恰當(dāng)。<o:p></o:p> ELISA屬固相免疫測(cè)定，抗原、抗體的聯(lián)絡(luò)只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有對(duì)等的和固相抗聯(lián)絡(luò)的時(shí)機(jī)，只需最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。<o:p></o:p> 這是一個(gè)逐漸平衡的進(jìn)程，因此需經(jīng)渙散才調(diào)抵達(dá)反響的完畢。在這今后參加的酶符號(hào)抗體與固相抗原的聯(lián)絡(luò)也相同如此。這便是為何ELISA反響老是需求必定時(shí)刻的溫育。<o:p></o:p> 溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃（冰箱溫度）等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體聯(lián)絡(luò)的合適溫度。在建立ELISA方法作反響動(dòng)力學(xué)研討時(shí)，實(shí)驗(yàn)標(biāo)明，兩次抗原抗體反響通常在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)品的生成可達(dá)高峰。<o:p></o:p> 為加快反響，可前進(jìn)反響的溫度，有些實(shí)驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為徹底，在放射免疫測(cè)定中多使反響在冰箱中過(guò)夜，以構(gòu)成最多的堆積。但因所需時(shí)刻太長(zhǎng)，在ELISA中通常不予選用。<o:p></o:p> ELISA試劑盒保溫的方法除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，通常均選用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度活絡(luò)平衡。<o:p></o:p> 為防止蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時(shí)可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，最終將ELISA板放在濕紗布上。<o:p></o:p> 濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)分更應(yīng)如此。無(wú)論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能活絡(luò)平衡。室溫溫育的反響，操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)重束縛在規(guī)則的范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時(shí)可根據(jù)說(shuō)明書(shū)的央求操控溫育。<o:p></o:p> 室溫溫育時(shí)，ELISA板只需平置于操作臺(tái)上即可。應(yīng)留神溫育的溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則力求精確。為確保這一點(diǎn)，一個(gè)人操作時(shí)，一次不宜多于兩塊板一同測(cè)定。<o:p></o:p>

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