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ELISA試劑盒的用途

1．抗原<o:p></o:p> 在ELISA中應(yīng)用的抗原要求有較高的特異性、親和力和純度。主要有3類，即自然抗原、人工合成抗原和基因重組抗原。自然抗原的純度不高，特異性不強(qiáng)。<o:p></o:p> 合成抗原一般為多肽片段，缺乏天然抗原所具有的立體結(jié)構(gòu)表位，親和力不高，可能導(dǎo)致相應(yīng)表位的抗體漏檢；基因重組抗原具有安全、特異性強(qiáng)、親和力高、產(chǎn)量大等特點，是一種比較理想的抗原，但其純化比較困難。<o:p></o:p> 2．抗體<o:p></o:p> 在ELISA中應(yīng)用的抗體可分為多克隆抗體（多抗）和單克隆抗體（單抗）。多抗取白免疫動物的抗血清，制備較簡單，但抗血清成分復(fù)雜，除含針對抗原（多個表位）的抗體外，還含有多種其他抗體，親和力和特異性相對要低于單抗，且制備周期長，批間差異較大。<o:p></o:p> 而單抗僅針對抗體的單一表位，親和力和特異性均較多抗高，且制備技術(shù)成熟，產(chǎn)量大，批間差異小，但結(jié)合位點的單一也正是其弱點之所在，在雙抗體夾心法中，如包被和指示抗體使用同一單抗，則由于結(jié)合位點的缺乏，容易造成假陰．性結(jié)果。在使用雙單抗一步法時，應(yīng)注意抗原過剩時的“鉤狀效應(yīng)"。<o:p></o:p> 3．固相載體<o:p></o:p> 固相載體是ELISA中用以分離結(jié)合標(biāo)記物和游離標(biāo)記物的主要手段，應(yīng)與各種免疫活性物質(zhì)有良好的結(jié)合性能并且不改變其免疫活性。常用的固相載體有聚苯乙烯塑料和硝酸纖維素膜。<o:p></o:p> 4．包被<o:p></o:p> 將免疫活性物質(zhì)（抗原或抗體）結(jié)合于固相載體上的過程稱為包被。常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纖維薄膜等；常用的方法有吸附法、化學(xué)交聯(lián)法及親和素-生物素間接包被法，特別是后一方法，效率高，而且可用以包被不易吸附在固相上的各種免疫活性物質(zhì)。<o:p></o:p> 具體做法是先將鏈霉親和素包被在固相載體上，然后使與生物素化的抗原或抗體與之結(jié)合。由于親和素與生物素之間的高親和力，抗原或抗體即間接結(jié)合在親和素包被的固相上。<o:p></o:p>

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