如何解決 ELISA 結(jié)果中的高背景噪音

<p>&nbsp;<span style="font-size: 12px;"> &nbsp; &nbsp;ELISA實驗高背景噪音會導(dǎo)致假陽性結(jié)果，了解高背景的因素至關(guān)重要。本文從樣品質(zhì)量、包被緩沖液、阻斷緩沖液、洗滌緩沖液、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)分析帶大家了解ELISA實驗產(chǎn)生高背景的因素。了解這些因素可以避免后期實驗出現(xiàn)假陽性，影響實驗成本及時間。</span></p> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; </span><strong><span style="font-size: 12px;">樣品質(zhì)量</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; ELISA中高背景噪音的主要來源之一是樣品質(zhì)量。內(nèi)毒素、去垢劑或蛋白質(zhì)等污染物會干擾抗體或酶底物的結(jié)合，并產(chǎn)生假陽性信號。為避免這種情況，應(yīng)使用清潔無菌的設(shè)備和試劑，妥善儲存和處理樣品，并避免反復(fù)凍融。您還應(yīng)適當(dāng)稀釋樣品，以避免飽和或干擾效應(yīng)。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; </span><strong><span style="font-size: 12px;">包被緩沖液</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 另一個可能影響ELISA背景噪音的因素是用于將捕獲抗體或抗原附著到微孔板孔中的包被緩沖液。包被緩沖液應(yīng)具有最佳的pH值和離子強(qiáng)度，以確保包被的穩(wěn)定性和特異性。常見的包被緩沖液是碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液，其pH值為9.6，適用于大多數(shù)蛋白質(zhì)。然而，某些蛋白質(zhì)可能需要不同的緩沖液，例如PBS（磷酸鹽緩沖液）或MES（2-(N-嗎啉基)乙磺酸），以避免變性或聚集。還應(yīng)避免在包被緩沖液中添加疊氮化鈉或其他防腐劑，因為它們會抑制酶活性。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; </span><strong><span style="font-size: 12px;">阻斷緩沖液</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 封閉緩沖液用于在包被步驟后封閉微孔板孔上的非特異性結(jié)合位點。封閉緩沖液應(yīng)與包被緩沖液和檢測系統(tǒng)兼容，并且不應(yīng)含有任何可能與抗體或酶底物發(fā)生反應(yīng)的成分。常見的封閉緩沖液是BSA（牛血清白蛋白），其濃度可在PBS或TBS（Tris緩沖液）中使用，濃度為1-5%。然而，某些抗體或抗原可能需要不同的封閉劑，例如酪蛋白、明膠或奶粉，以降低交叉反應(yīng)性或提高信噪比。您還應(yīng)將封閉緩沖液孵育足夠時間和溫度，以確保完全覆蓋孔板。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp;</span><strong><span style="font-size: 12px;"> 洗滌緩沖液</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 每次孵育步驟后，使用洗滌緩沖液去除微孔板孔中未結(jié)合或過量的試劑。洗滌緩沖液應(yīng)與包被緩沖液和檢測系統(tǒng)兼容，且不應(yīng)含有任何可能影響結(jié)合或酶活性的成分。常用的洗滌緩沖液是含0.05-0.1%Tween20的PBS或TBS，它們可以降低表面張力并提高洗滌效率。然而，某些抗體或抗原可能需要不同的洗滌緩沖液，例如PBST（含0.1%TritonX-100的PBS）或TBST（含0.1%TritonX-100的TBS），以提高溶解度或特異性。您還應(yīng)使用足夠的體積和循環(huán)徹底、持續(xù)地清洗孔板，以避免任何殘留試劑。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; </span><strong><span style="font-size: 12px;">檢測系統(tǒng)</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 檢測系統(tǒng)用于測量微孔板孔中結(jié)合分析物產(chǎn)生的信號。檢測系統(tǒng)可以是比色法、化學(xué)發(fā)光法或熒光法，具體取決于所用的酶和底物。檢測系統(tǒng)應(yīng)針對檢測的靈敏度和動態(tài)范圍進(jìn)行優(yōu)化，并且在沒有分析物的情況下不應(yīng)產(chǎn)生任何背景信號。為此，您應(yīng)該使用高質(zhì)量且特異性的抗體，選擇合適的酶和底物，嚴(yán)格按照孵育時間和溫度的說明書。避免暴露在光線或空氣中，因為它們會降低底物或信號。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; </span><strong><span style="font-size: 12px;">&nbsp; 數(shù)據(jù)分析</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; ELISA故障排除的最后一步是數(shù)據(jù)分析，用于解釋結(jié)果并計算分析物的濃度。數(shù)據(jù)分析應(yīng)使用合適的軟件或方法（例如標(biāo)準(zhǔn)曲線或回歸模型）進(jìn)行，并應(yīng)考慮任何異常值或誤差。您還應(yīng)使用適當(dāng)?shù)膶φ眨ɡ缈瞻住?biāo)準(zhǔn)品和樣品）來驗證檢測的準(zhǔn)確度和精密度，并校正任何背景噪音。您還應(yīng)繪制數(shù)據(jù)圖表，并直觀地檢查信號的分布和變異性。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 綜合上述介紹，為了避免后期實驗出現(xiàn)背景噪音高，影響實驗成本及時間，結(jié)合自身的樣本和實驗要求須嚴(yán)格的按照說明書進(jìn)行。如果你對目前ELISA試劑盒的背景噪音高問題還有疑問，歡迎前來咨詢了解。</span></div>