用于ELISA實驗的組織提取物制備SOP

<p>&nbsp;<span style="font-size: 12px;"> &nbsp; &nbsp;ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）檢測的樣本類型包括常見的血液（血清、血漿）、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清液，以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、沖洗液、唾液、腦脊液、胸腹水等。這些樣本的采集時間、處理方法以及保存方式都會影響ELISA實驗的結(jié)果。以下總結(jié)了常見的組織樣本處理方法。</span></p> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 組織提取物樣品可能指從生物組織中提取的物質(zhì)樣品，例如DNA、RNA、蛋白質(zhì)等。該過程通常涉及分離和純化目標分子，以供進一步分析或?qū)嶒?lt;/span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 組織樣本通常制成組織勻漿并進行如下處理：</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 1.收集組織，用冰冷生理鹽水沖洗，去除血液，用濾紙擦干，稱重，除去附著的結(jié)締組織，稱量組織塊。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 2.用移液器量取0.1MPBS或使用0.86%冷生理鹽水。均質(zhì)液或生理鹽水的總體積應為組織塊重量的9倍。用眼科剪盡快（自然）剪開組織塊。操作應在冰水浴中進行，將裝有組織的小燒杯放入冰水中。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 3.均質(zhì)方法有多種：</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; a)手工均質(zhì)：將切碎的組織倒入玻璃均質(zhì)管中，再用剩余的1/3均質(zhì)培養(yǎng)基或生理鹽水沖洗燒杯中剩余的組織碎塊，一起倒入均質(zhì)管中。均質(zhì)時，左手握住均質(zhì)管，將下端插入盛有冰水混合液的容器中。右手將搗棒垂直插入套管，上下研磨數(shù)十次（6～8分鐘），研磨充分，使組織均質(zhì)成漿。b</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; b)機械均質(zhì)：用組織搗碎機在10000～15000r/min轉(zhuǎn)速下上下研磨，可制成10%的組織勻漿。也可用內(nèi)切式組織勻漿機進行制備（勻漿時間：10秒/次，間隙30秒，在冰水中連續(xù)3～5次），皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 4.將配制好的10%勻漿液放入離心機，4℃、3000rpm離心15分鐘，保留離心勻漿液的上清液，棄去下面的沉淀物。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 5.取上清液。分裝后冷凍備用。2-8&deg;C保存24-48小時。-20&deg;C保存1個月。-70&deg;C保存6個月。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 6.根據(jù)您的實驗需要，取適量上清液，進行各種ELISA測定。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp;</span><strong><span style="font-size: 12px;"> 樣品保存</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 樣品處理過程即為收集目標蛋白的過程。由于蛋白質(zhì)易變性降解，因此操作應盡可能溫和。樣品處理后的保存也至關重要，尤其要注意避免反復凍融。處理后的樣品可密封后單獨包裝保存。4&deg;C下保存時間不應超過1周，-20&deg;C下保存時間不應超過1個月，-80&deg;C下保存時間不應超過2個月。標本使用前應緩慢平衡至室溫，切勿加熱使其融化。</span></div>