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別讓ELISA實驗功虧一簣！從原理到選購，一文教你讀懂酶標儀

ELISA實驗的最后一步，決不能功虧一簣！還在擔心酶標儀的突然罷工，讓您數(shù)小時的心血、珍貴的樣品和試劑瞬間化為泡影嗎？一臺真正可靠的酶標儀，是您獲得精準數(shù)據的最后一道保障。它，究竟該是什么樣？       酶標儀，即酶聯(lián)免疫檢測儀，用于檢測ELISA反應后的吸光度值。它主要由光路系統(tǒng)和信號采集系統(tǒng)組成。其工作原理為：<o:p></o:p>       1、光源燈發(fā)出的光波經過濾光片或單色器轉變?yōu)橐皇鴨紊猓徊糠謫紊獗粯吮疚?，另一部分透射過標本照射到光電探測器上；<o:p></o:p>       2、光電探測器將光信號轉換成相應的電信號，經過一系列的信號處理后，送入微處理器進行數(shù)據處理和計算，最后將結果顯示出來。<o:p></o:p>       微孔板讀數(shù)儀分類<o:p></o:p>       根據光學系統(tǒng)的類型，酶標儀可分為濾光片式酶標儀和光柵式酶標儀。<o:p></o:p>       光學濾光片是一塊涂有光學薄膜的光學玻璃板，它可以改變通過濾光片的波長，并分離不需要的波長。根據選配的濾光片，可以僅截取特定波長進行檢測。<o:p></o:p>       光柵式是利用物理衍射光柵的原理，將白光源以不同的角度分光，再通過一系列狹縫分離出選定的激發(fā)波長。光柵酶標儀可以截取光源波長范圍內的任意波長，靈活性更高。<o:p></o:p>       目前，濾波系統(tǒng)由于其價格相對便宜、檢測靈敏度高、帶寬選擇性強、濾波器切換速度快等特點，得到了較為廣泛的應用。<o:p></o:p>       微孔板讀數(shù)儀選擇<o:p></o:p>       現(xiàn)在您了解了原理，那么如何選擇您喜歡的微孔板讀數(shù)儀呢？可以考慮以下參數(shù)：<o:p></o:p>       1.測量波長<o:p></o:p>       一般酶標儀的測量波長在400~750nm之間或800nm，完全可以滿足ELISA的顯色測定。目前常見的ELISA試劑盒所用的標記酶主要為辣根過氧化物酶（HRP），底物通常為四甲基聯(lián)苯胺（TMB），在酸性或堿性終止液作用下，最終生成的黃色或藍色產物的最大吸收波長分別在450-490nm和630-650nm左右，因此可根據實驗需求選擇儀器。<o:p></o:p>       2.測量吸光度范圍<o:p></o:p>       通常酶標儀的吸光度測量范圍在0~2.5之間，可以滿足ELISA的測定要求。早期酶標儀能夠測的吸光度一般在0~2.5之間，現(xiàn)在基本已經拓寬到3.5以上，并且能夠保持良好的精密度和線性。因此，對于酶標儀的吸光度范圍，不必刻意追求大的吸光度范圍，主要看在一定吸光度范圍內的線性和精密度。<o:p></o:p>       3.檢測速度<o:p></o:p>       酶標儀的檢測速度是指完成一次比色測定所需的時間。酶標儀的檢測速度快，有助于提高檢測的精度，即避免測定過程中因測定時間不同而導致每個微孔之間吸光度的差異。目前市面上常見的酶標儀的檢測速度很快，通常在幾秒鐘之內。<o:p></o:p>       4.振動盤功能<o:p></o:p>       酶標儀的搖板功能是指酶標儀在進行比色測定前，對酶標板的孔板進行震蕩混勻，使孔內顏色均勻一致。目前市面上常見的酶標儀都具備搖板功能，區(qū)別在于搖板的方式，有的可以通過上下、左右或旋轉，以及振蕩幅度任意調節(jié)。使用帶有搖板功能的酶標儀進行ELISA測定，顯色反應完成后加入終止液，無需震蕩混勻，直接放入酶標儀進行測定即可。<o:p></o:p>       5.軟件功能<o:p></o:p>       軟件功能是指酶標儀對ELISA定性、定量測定以及其他測定方法（如酶標動力學、紫外、凝集等）的結果進行統(tǒng)計分析和報告的功能。軟件功能是中高端酶標儀非常重要的功能。<o:p></o:p>       軟件可以在讀數(shù)前設置讀數(shù)孔、波長、計算公式等，并在讀數(shù)后顯示相關數(shù)據。對于用戶來說，良好的軟件功能將對實際工作有很大的幫助。在ELISA定性測定中，如果酶標儀存在陽性判斷值（cut-off），而其測定結果存在“灰色區(qū)域”（即測得的吸光度在cut-off周圍的一定區(qū)域內，則該區(qū)域內的結果應為“可疑”），統(tǒng)計計算功能不僅方便了實驗室工作人員，在某些特定情況下也具有很高的實用價值。<o:p></o:p>       回到我們最初的問題：如何避免因酶標儀的失誤而讓數(shù)小時的心血付諸東流？答案就在于正確的認知和選擇。希望通過今天的介紹，您對酶標儀的原理和挑選方法有了更清晰的認識。選擇一臺對的設備，不僅是投資，更是為您的珍貴樣品和寶貴時間上一道保險。未來，更加智能、可靠的酶標儀必將成為您實驗室中值得信賴的伙伴。<o:p></o:p>

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