確保ELISA數(shù)據(jù)質(zhì)量：關(guān)鍵指標(biāo)解讀

<p>&nbsp;<span style="font-size: 12px;"> &nbsp; &nbsp;ELISA實驗常用于檢測和定量復(fù)雜混合物中的特定蛋白質(zhì)。結(jié)果出來后，需要一定的方法來評估數(shù)據(jù)是否可靠。主要從以下幾個方面進行評估：批內(nèi)準(zhǔn)確度、稀釋線性、回收率、靈敏度（檢測限）等。</span></p> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <h3><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp;&nbsp;</span>批內(nèi)準(zhǔn)確度</h3> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 1、批內(nèi)準(zhǔn)確度：通常指測試孔板之間的重復(fù)性。變異系數(shù)(CV)通常用于評估批內(nèi)準(zhǔn)確度，其值為標(biāo)準(zhǔn)差&sigma;與平均值&micro;的比值。每個樣本的%CV通常應(yīng)小于10%。%CV越大，孔間差異越大，重復(fù)性越差，結(jié)果也越不可靠。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 注意：CV值過大可能由以下原因引起：移液不準(zhǔn)確。使用前請確保移液器吸頭牢固地連接到移液器上，以確保吸取正確的液體量；試劑濺入其他孔中；樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染；試劑之間交叉污染；酶標(biāo)板內(nèi)溫度不一致。這可以通過將酶標(biāo)板置于恒溫、遠(yuǎn)離氣流的環(huán)境中孵育來避免；有些孔是完全干燥的。??這需要在孵育過程中始終蓋上酶標(biāo)板的蓋子。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <h3><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 稀釋線性</span></h3> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 稀釋線性：稀釋線性是指測試樣品在不同稀釋度下結(jié)果的準(zhǔn)確度，不同稀釋倍數(shù)下測定值與精密值的比值應(yīng)在70%~130%之間。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 在沒有基質(zhì)干擾的情況下，無論稀釋多少，測量值都與真實值一致。當(dāng)存在基質(zhì)干擾時，樣品稀釋會導(dǎo)致基質(zhì)被稀釋，從而導(dǎo)致非特異性結(jié)合比例降低，測量值也會隨著稀釋倍數(shù)的變化而發(fā)生變化。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <h3><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp;&nbsp;</span>回收率</h3> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 回收率：回收率用于判斷目標(biāo)物質(zhì)的檢測是否受到樣品基質(zhì)差異的影響。例如，待測上清液中含有大量的蛋白質(zhì)，可能會阻礙抗體結(jié)合，導(dǎo)致信噪比升高，導(dǎo)致檢測到的目標(biāo)物質(zhì)濃度低于實際值?；厥章适峭ㄟ^將已知濃度的目標(biāo)物質(zhì)加標(biāo)到不同的樣品基質(zhì)中來確定的。如果平均回收率為80%-120%，則認(rèn)為樣品基質(zhì)對準(zhǔn)確定量分析物檢測能力的影響較小?；厥章?用基質(zhì)稀釋的目標(biāo)物質(zhì)檢測值/用基質(zhì)稀釋的目標(biāo)物質(zhì)測定值*100%。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 如果回收率過高或過低，則表明實驗體系受到較大的復(fù)雜基質(zhì)干擾。例如，當(dāng)將1000pg/mL的IL-2加標(biāo)到空白血清中時，回收率僅為50%，這表明血清中存在干擾因素，影響抗體與IL-2分子的結(jié)合。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <h3><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 靈敏度（檢測限）</span></h3> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 靈敏度（檢測限）：靈敏度是指能夠與背景區(qū)分開的最低分析物水平，常被稱為分析靈敏度或檢測限。一般有三個指標(biāo)，分別是LOB（最低檢測限）、LOD（最低檢測限）和LOQ（最低定量限）。LOB（Limitofblank）就是我們通常所說的空白檢測限。</span></div> <div>&nbsp;</div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; &nbsp;LOB是指使用空白樣品，在一定概率下能夠測得的最高測量結(jié)果。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; LOD（LimitofDetection）就是我們通常所說的檢測限，它不使用空白樣品進行檢測，是在測試低濃度分析物樣品時，在一定的概率條件下能夠測得的最低值。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; LOQ（LimitofQuantitation）就是我們通常所說的定量限。這也是通過測試低濃度分析物樣品得到的一個較低的值。這個值的準(zhǔn)確性是有要求的，也就是說，它不僅要能夠檢測出來，還要保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。打個比方：比如一個物體在遠(yuǎn)處，隨著距離的縮短，你的眼睛從看不見（空白檢測限）到看得見（檢測限），最后到可以確認(rèn)是什么物體的程度（定量限）。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <h3><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 信噪比</span></h3> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 信噪比（S/N）是信號與噪聲的比值，即樣品數(shù)據(jù)與空白數(shù)據(jù)的比值。一般以信噪比為3:1時對應(yīng)的濃度或量為檢測限，以信噪比為10:1時的量為定量限。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 總之，評估ELISA實驗數(shù)據(jù)的可靠性需要綜合考慮批內(nèi)精密度、稀釋線性、回收率、靈敏度以及信噪比等多個指標(biāo)。只有當(dāng)這些指標(biāo)都符合要求時，才能認(rèn)為實驗結(jié)果可靠，并為后續(xù)的研究提供有力的支持。良好的實驗操作和對這些指標(biāo)的正確理解和應(yīng)用，是獲得高質(zhì)量ELISA數(shù)據(jù)，并最終得出可信結(jié)論的關(guān)鍵。如果實驗結(jié)果不理想，需要仔細(xì)檢查實驗的每個步驟，找出可能存在的問題并進行改進，以確保最終數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。</span></div>