生化試劑，常見問題的解決方法

<p>試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的目標之一，但不能反映試劑質(zhì)量的悉數(shù)。試劑成份、純度、用量及安穩(wěn)性，才是確保試劑質(zhì)量的關(guān)鍵所在。目前市售的一些試劑具有抗攪擾效果，主要是經(jīng)過參加抗攪擾物質(zhì)或運用新的色素原以防止內(nèi)源性物質(zhì)的攪擾。但值得注意的是：一些實驗項目在消除內(nèi)源性物質(zhì)攪擾的一起，會帶來樣品含量真實性的改變。<br /> 1 試劑空白<br /> 試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的目標之一。每種試劑都有必定的空白吸光度規(guī)模，試劑空白吸光度的改動往往提示該試劑的蛻變；如運用Trinder反響為原理的檢測試劑會因含酚類物質(zhì)被氧化為醌而變?yōu)槌嗌A性磷酸酶、r一谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、淀粉酶等檢測試劑會因基質(zhì)分化出硝基酚或酚基苯胺而變黃。有些試劑久置后變污濁。這些狀況均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等負反響，在放置進程中其試劑空白吸光度會因NADH自行氧化為NAD+而下降。原則上，吸光度上升的反響，其試劑空白吸光度越低越好，不能超越一個高限；相反，吸光度下降的反響，其試劑空白吸光度不能低于一個低限。因而，試劑空白吸光度限值，常作為程序參數(shù)輸入儀器，如經(jīng)核對超限，儀器會主動報警，提示替換試劑。需求指出的是，還原型輔酶I（或II）等投料量缺乏或殘次的原料，往往需求加大用量，才使&ldquo;表觀&rdquo;吸光度上升，將就過試劑空白核對的&ldquo;關(guān)&rdquo;，其成果為如下狀況：<br /> 1線性規(guī)模變窄 現(xiàn)象：高值測不高。原因：生產(chǎn)試劑時有效成分投料量缺乏；試劑成份安穩(wěn)性較差。<br /> 2 靈敏度變低現(xiàn)象：酶促反響速度曲線斜率下降，測定成果有嚴峻系統(tǒng)誤差。原因：試劑底物濃度缺乏。<br /> 3 低值偏高 現(xiàn)象：試劑空白的改變曲線（吸光度VS時刻）明顯動搖。原因：試劑本身不安穩(wěn)，自行分化；東西酶純度不行，雜酶含量超限，導(dǎo)致攪擾效果。<br /> 2 樣品信息<br /> 樣品的溶血、脂血、黃疸等會對測定成果發(fā)作非化學(xué)反響的攪擾。因而，應(yīng)根據(jù)溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，采用雙波長或多波長的檢測模式，并在成果核算中扣除因溶血、脂血、黃疸引起的影響，削減攪擾程度。<br /> 3 測定規(guī)模<br /> 每種待測物都有一個可測定的濃度或活性規(guī)模，樣品成果若超越此規(guī)模，分析儀將顯現(xiàn)成果超越規(guī)模的提示。表示試劑現(xiàn)已蛻變，應(yīng)替換合格試劑。<br /> 4 底物耗盡<br /> 運用接連監(jiān)測法、兩點法測定酶活性時，若酶活性十分高，底物挨近被耗盡，吸光度上升或下降會超越某一吸光度改變規(guī)模，監(jiān)測期的吸光度將違背線性，使測定成果不可靠。<br /> 5 酶的預(yù)活化<br /> 測定血清中的某些酶，如CK，離體（采血）后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基（一SH）被氧化造成的。只要經(jīng)過恰當(dāng)?shù)倪€原效果才干從頭激活。如CK&mdash;NAC試劑盒即含有CK活化劑，名為N一乙酰半胱氨酸。實驗研討證明，NAC對血清中已失活的CK活化進程約需180 S。這就是CK測定為什么要延遲時刻較長的理論依據(jù)。在AST，ALT采用IFCC推薦辦法測守時需求磷酸吡哆醛預(yù)活化。需求著重：含有活化劑的生化試劑，其測定酶活性的成果要高些。<br /> 6 試劑抗攪擾效果的合理性有些液體雙試劑，其實質(zhì)并不真正具有抗攪擾的能力而只是處理了試劑的液體化和安穩(wěn)性問題。如，ALT試劑盒中，NADH在pH7.5~7.8水溶液中極不安穩(wěn)，在pH&gt;8.7時才干安穩(wěn)保存。因而，為了確保試劑安穩(wěn)性，液體雙試劑的R1需求保持pH&gt;8.7，但此刻LDH活性大大下降，就失掉消除內(nèi)源性丙酮酸的功用，只要參加試劑R2后，反響混合液的pH下降至LDHzui適pH，在經(jīng)過延遲時刻60 S后，才干消除內(nèi)源性丙酮酸的攪擾。再如，Tfinder反響中抗Vc攪擾問題：由于維生素c易氧化，樣品中Vc會競爭反響生成的過氧化氫，而發(fā)作負攪擾。因而，在試劑R1中參加抗壞血酸氧化酶，這種辦法是有效的，但不必定有很大的含義。由于Vc攪擾有必要一起具有二個條件：a）Vc攝入量較多；b）采血后當(dāng)即測定。實驗標明離體血清中Vc在90 min后會悉數(shù)被氧化。又如，運用胺類新色原。a）分子共軛結(jié)構(gòu)特性使得靈敏度進步，相應(yīng)能夠削減樣本用量，zui終能有效地下降攪擾物的量．b）使生成胺類色素原zui大吸收峰由500~520 nm移至550 nm以上，以避開黃疸、溶血攪擾。如：亞鐵氰化鉀一H 0 ，能有效防止黃疸攪擾的理論依據(jù)是亞鐵氰化鉀與H。0。親和力遠遠大于膽紅素。甘油三酯測定，有人主張選用雙試劑辦法消除內(nèi)源性甘油，這個辦法是可行的，但忽視了一個化學(xué)平衡理論。由于一切的酯在水溶液中都不是簡略地以酯的方式存在，而是以水解與酯化相平衡的方式存在。在一個平衡系統(tǒng)中，假如去除游離甘油，這個平衡就向生成甘油方向移動，甘油三酯就會從頭水解，生成新的甘油，到達新的平衡，因而樣品與R1試劑孵育時刻越長，測得甘油三酯值就越低。甘油三酯測定，不只要去除游離甘油，而且還要戰(zhàn)勝樣本含量真實性發(fā)作的改變，試劑中有必要參加甘油激酶，而且延遲時刻要標準化。所以，一些實驗項目在消除內(nèi)源性物質(zhì)攪擾的一起，會帶來樣品含量真實性的改變。<br /> 酶聯(lián)生物一路走來依托豐厚的經(jīng)歷、優(yōu)秀的質(zhì)量、足夠的庫存、精確的交貨時刻、極具競爭力的價格的優(yōu)勢等成為試劑行業(yè)的遙遙*者。當(dāng)然這些都離不開我們的支撐。我們在日后不論是銷售部分、技術(shù)部分還是行政部分都要不斷強大，虛心學(xué)習(xí)，群策群力，事無具細的為客戶所想，急客戶所急。讓客戶滿足，才是我們永久的追求！&nbsp;</p>