液相色譜常用柱前衍生化

<p>運(yùn)用液相色譜最多的是紫外檢測器，為了使一些沒有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外檢測器檢測，往往要經(jīng)過衍生化反響在這些化合物的分子中引進(jìn)有強(qiáng)紫外吸收的基團(tuán)。這些衍生物可被紫外檢測器檢測。<br /> 大多數(shù)紫外衍生反響來自經(jīng)典的廣度剖析和有機(jī)定量剖析，新的衍生化反響和衍生試劑隨液相色譜的開展而開展，這些反響的原理都來自有機(jī)組成，所以就要求操作者對(duì)有機(jī)組成有所了解。可是，因?yàn)橹把苌菫樯V剖析預(yù)備樣品，需求衍生處理的樣品的含量水平緩所參與的衍生化反響進(jìn)程與常量有機(jī)組成反響比較有著明顯的不同，而是類似于近年來開展的微量有機(jī)組成，紫外衍生化反響要求挑選反響產(chǎn)率高、重復(fù)性好的反響。過量試劑和試劑中的雜質(zhì)如果會(huì)干擾下一步的色譜別離和檢測，則在色譜進(jìn)樣前要進(jìn)行純化別離。還要留意反響介質(zhì)對(duì)紫外吸收的影響。下面別離介紹一些常用的反響。<br /> (1)苯甲酰化反響 苯甲酰氯及其衍生物一對(duì)硝基苯甲酰氯，3，5-二硝基苯甲酰氯和對(duì)甲氧摹苯甲酰氯都能夠同胺、醇和酚類化合物反響，生成強(qiáng)紫外吸收的苯甲酸酯類衍生物，過量試劑能夠經(jīng)過水解除掉，反響產(chǎn)品可用有機(jī)溶劑提取后直接進(jìn)樣。<br /> (2) 2，4-二硝基氟代苯 (DNFB) 的反響 DNFB與醇的反響產(chǎn)率很低，但可與大多數(shù)伯胺、仲胺和氨基酸反響，生成強(qiáng)紫外吸收的苯胺類衍生物。<br /> (3) 苯基異硫氰酸酯 (PITC) 的反響 PITC可與氨基酸反響，生成苯基己內(nèi)酰硫脲衍生物PTH-氨基酸。<br /> 苯基異氰酸酯與醇類反響生成苯基甲酸酯。<br /> (4) 苯基磺酰氯的反響 苯基磺酰氯可與伯胺和仲胺反響。<br /> 甲苯磺酰氯可與多氨基化合物反響，不僅能進(jìn)步其檢測是敏度，還可改變HPLC的別離度。<br /> (5) 有機(jī)酸的酯化反響 有機(jī)酸很容易與酰溴基反響生成酯，常用的酰溴基試劑有苯甲酰溴、甲氧基苯甲酰演、對(duì)溴基苯甲酰溴和對(duì)硝基苯甲酰溴等。酯化反響在極性溶劑(如乙腈、丙酮或四氫呋喃)中進(jìn)行，有時(shí)需加催化劑，如冠醚加鉀離子、三乙胺或N-二異丙基胺等。<br /> (6) 羰基化合物的反響 醛類和酮類中的羰基可與2，4-二硝基苯肼 (DNPH) 反響， 生成苯腙衍生物，反響在弱酸條件下進(jìn)行。<br /> &nbsp;</p>